LYRM4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412759-ACT

A LYRM4 humana (LYR motif containing 4), também conhecida como ISD11, é uma proteína da matriz mitocondrial que atua como cofator essencial do complexo de cisteína dessulfurase NFS1, necessário para a biogênese de aglomerados ferro–enxofre (Fe–S). Ao estabilizar a maquinaria central de transferência de enxofre e apoiar a montagem de Fe–S dependente de proteínas “scaffold” (andaime), a LYRM4 ajuda a manter a atividade de enzimas dependentes de Fe–S envolvidas na fosforilação oxidativa, na tradução mitocondrial e na homeostase redox. A disrupção ou insuficiência dessa via pode prejudicar a função da cadeia respiratória, elevar o estresse oxidativo e comprometer o metabolismo energético celular, relacionando a disfunção mitocondrial associada à LYRM4 a mecanismos de doenças neurometabólicas. Por isso, a LYRM4 é frequentemente estudada no contexto do controle de qualidade mitocondrial, da adaptação metabólica e das relações genótipo-fenótipo em defeitos de montagem de aglomerados Fe–S.

LYRM4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LYRM4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LYRM4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LYRM4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LYRM4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LYRM4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LYRM4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LYRM4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LYRM4 em células tumorais com expressão de LYRM4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.