LXR beta/NER/NR1H2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423617

概要

Nr1h2 は、脂質およびコレステロール恒常性の転写調節因子として機能するリガンド依存性の核内受容体である肝臓 X 受容体ベータ（LXRβ/NER）をコードする。マウス細胞では、LXRβ は RXR とヘテロ二量体を形成し、逆コレステロール輸送、脂肪酸代謝、ならびに炎症関連の遺伝子プログラムを制御する遺伝子群を調節することで、代謝シグナルと自然免疫シグナルを統合する。この経路はマクロファージの極性化、脂肪細胞の生物学、神経炎症応答とも交差しており、実験モデルにおける動脈硬化、代謝機能障害、CNS 炎症性表現型に関連する機構と Nr1h2 活性を結び付けている。LXRβ は複数組織にわたる転写ネットワークに影響するため、Nr1h2 の改変は核内受容体間クロストークやリガンド依存的な遺伝子制御を解析する目的で広く用いられている。

LXR beta/NER/NR1H2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNr1h2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nr1h2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nr1h2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LXR beta/NER/NR1H2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LXR beta/NER/NR1H2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nr1h2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LXR beta/NER/NR1H2の機能に不可欠なNr1h2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nr1h2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LXR beta/NER/NR1H2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびLXR beta/NER/NR1H2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nr1h2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LXR beta/NER/NR1H2 HDRプラスミド（m）および LXR beta/NER/NR1H2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNr1h2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNr1h2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。