Plasmide CRISPR/Cas9 KO Lunatic Fringe (m): sc-421414

Présentation

Lfng code Lunatic Fringe, une β1,3‑N‑acétylglucosaminyltransférase localisée dans l’appareil de Golgi, qui modifie les répétitions de type facteur de croissance épidermique (EGF) O‑fucosylées sur les récepteurs NOTCH. En modifiant les interactions entre récepteur Notch et ligand, Lunatic Fringe ajuste l’intensité du signal Notch ainsi que les dynamiques oscillatoires qui gouvernent la segmentation des somites, la formation des frontières et les décisions de destinée cellulaire au cours du développement de la souris. L’activité de Lfng est associée à l’horloge de segmentation et à des programmes plus larges dépendants de Notch, influençant le maintien des progéniteurs et la différenciation dans de multiples tissus. Une modulation dérégulée de LFNG/Notch est pertinente pour les défauts de mise en place des patrons développementaux et offre un point d’entrée mécanistique pour étudier les contributions de la voie Notch à des phénotypes associés aux maladies dans des systèmes modèles.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Lunatic Fringe (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Lfng dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Lfng, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Lfng à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Lunatic Fringe.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Lfng pour l'étude de la signalisation de Lunatic Fringe, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Lfng essentiels à la fonction de Lunatic Fringe
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Lfng pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Lunatic Fringe plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Lunatic Fringe plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Lfng. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Lunatic Fringe plasmide HDR (m) et le Lunatic Fringe (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Lfng pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Lfng définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.