Particules Lentivirales d'Activation (m) LTBP-3: sc-421482-LAC

Ltbp3 code la latent transforming growth factor beta binding protein 3 (LTBP-3), une glycoprotéine de la matrice extracellulaire qui se lie aux complexes latents de TGF-β et régule leur sécrétion, leur stockage et leur activation au sein de la niche péricellulaire. En contrôlant la biodisponibilité du TGF-β, LTBP-3 influence des programmes transcriptionnels dépendants de SMAD qui gouvernent le comportement des cellules mésenchymateuses, le remodelage matriciel et l’organisation du développement. Dans des systèmes murins, une activité altérée de Ltbp3 a été associée à une homéostasie dysrégulée des tissus conjonctifs et à des défauts du développement squelettique, cranio-facial et cardiovasculaire, reflétant le rôle central de la signalisation TGF-β dans la morphogenèse. Ces propriétés font de LTBP-3 un nœud pertinent pour étudier le dialogue matrice extracellulaire–facteurs de croissance, la mécanotransduction et la dynamique de signalisation dans les fibroblastes, les lignages ostéogéniques et les cellules vasculaires.

Les particules d'activation lentivirales LTBP-3 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Ltbp3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales LTBP-3 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Ltbp3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de LTBP-3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Ltbp3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.