Plásmido CRISPR de Activación (h) LTBP-2: sc-403182-ACT

LTBP2 codifica la proteína de unión al TGF‑β latente 2 (LTBP‑2), una glucoproteína de la matriz extracelular que se asocia con microfibrillas ricas en fibrilina y contribuye al ensamblaje de la matriz, la elasticidad y la señalización célula–matriz. Aunque carece de la unión canónica a TGF‑β en comparación con otros miembros de la familia LTBP, LTBP‑2 influye en la arquitectura de las microfibrillas y puede modular indirectamente la disponibilidad de factores de crecimiento y las vías de mecanotransducción vinculadas a la remodelación de la matriz extracelular. La expresión de LTBP2 es relevante para la homeostasis del tejido conectivo y para la biología vascular y ocular; estudios genéticos y de expresión la asocian con trastornos que afectan la integridad de las microfibrillas, incluidos fenotipos de glaucoma y anomalías hereditarias del tejido conectivo. Como factor asociado a la matriz, LTBP‑2 se investiga con frecuencia en vías que regulan la organización de la MEC, la adhesión y la regulación del comportamiento celular dependiente de la rigidez tisular.

LTBP-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LTBP2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LTBP-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LTBP2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LTBP2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LTBP-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LTBP2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LTBP-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LTBP-2 en células tumorales con expresión de LTBP2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.