LSECtin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404538-ACT

ヒトCLEC4GはLSECtin（CLEC4G）をコードしており、肝類洞内皮細胞に主として発現するC型レクチンで、糖鎖依存的な認識および接着に機能します。LSECtinはその糖鎖認識ドメインを介して、肝類洞におけるエンドサイトーシスや細胞間相互作用の調節に関与し、肝臓微小環境における抗原の取り扱いと免疫細胞のトラフィッキングを形成します。CLEC4G/LSECtinの活性は、レクチン—糖タンパク質認識ネットワークや自然免疫シグナル伝達と交差し、炎症応答および組織恒常性に影響を及ぼします。発現の変化は肝炎症、線維化、腫瘍関連の免疫調節といった状況で報告されており、肝疾患の生物学的機序研究において重要です。

LSECtin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CLEC4Gの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LSECtin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CLEC4G 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCLEC4G転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LSECtinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCLEC4G遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLSECtin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCLEC4G発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLSECtin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。