Plásmido CRISPR de Activación (h) LRIG1: sc-403210-ACT

LRIG1 (repeticiones ricas en leucina y dominios tipo inmunoglobulina 1) codifica un regulador transmembrana de la señalización de quinasas receptoras de tirosina que modula la abundancia y la actividad de receptores como los miembros de la familia EGFR/ERBB y MET. A través de sus efectos sobre el recambio de receptores y la señalización posterior de MAPK/ERK y PI3K/AKT, LRIG1 contribuye al control de la proliferación, la diferenciación y la homeostasis tisular. En muchos contextos experimentales, LRIG1 se asocia con la biología de células madre/progenitoras epiteliales y neurales, donde puede influir en la señalización del nicho y en la restricción del ciclo celular. La expresión alterada de LRIG1 se ha vinculado con una señalización desregulada de factores de crecimiento observada en múltiples modelos relevantes para enfermedades, lo que respalda su uso como un nodo para el análisis de vías.

LRIG1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LRIG1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LRIG1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LRIG1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LRIG1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LRIG1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LRIG1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LRIG1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LRIG1 en células tumorales con expresión de LRIG1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.