Plasmide Double Nickase (h) LRCH4: sc-405444-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) LRCH4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide LRCH4 Double Nickase (h) et le plasmide LRCH4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant LRCH4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: LRCH4 Antibody (A-9): sc-377441
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) LRCH4 | sc-405444-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) LRCH4 | sc-405444-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LRCH4 (leucine-rich repeats and calponin homology domain containing 4) code une protéine cytosolique caractérisée par des domaines de type LRR et CH, généralement associés aux interactions protéine–protéine et à l’organisation du cytosquelette. Des données émergentes relient les membres de la famille LRCH à la régulation de la dynamique de l’actine, du trafic membranaire et de la signalisation de l’immunité innée, LRCH4 étant impliquée dans la modulation de voies inflammatoires proximales aux récepteurs, telles que les réponses médiées par les TLR. Par ces mécanismes, LRCH4 pourrait influencer la motilité cellulaire, l’adhésion et des programmes transcriptionnels sensibles au stress dans des contextes immunitaires et épithéliaux. Une signalisation inflammatoire dérégulée et le remodelage du cytosquelette sont des caractéristiques récurrentes dans les maladies immuno-médiées et en cancérologie, faisant de LRCH4 une cible pertinente pour des études mécanistiques des voies de signalisation.
LRCH4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LRCH4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LRCH4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LRCH4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LRCH4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.