LONP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411273-ACT

LONP1 codifica a protease Lon AAA+ da matriz mitocondrial, um componente central do controle de qualidade de proteínas na mitocôndria que acopla o desenovelamento dependente de ATP à proteólise de proteínas danificadas ou mal dobradas. Ao regular a renovação de subunidades da cadeia respiratória e de fatores associados ao nucleoide mitocondrial, a LONP1 sustenta a fosforilação oxidativa, a manutenção do DNA mitocondrial e a resposta integrada ao estresse mitocondrial. A atividade de LONP1 interage com vias que governam a proteostase, a homeostase de ROS e a apoptose, conectando a disfunção mitocondrial a alterações metabólicas e a decisões sobre o destino celular. A expressão ou a função desregulada de LONP1 tem sido associada a fenótipos de proteopatia mitocondrial e é frequentemente estudada no contexto de neurodegeneração, remodelamento metabólico de células cancerosas e mecanismos de doenças mitocondriais hereditárias.

LONP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LONP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LONP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LONP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LONP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LONP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LONP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LONP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LONP1 em células tumorais com expressão de LONP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.