LMP2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401615-ACT

PSMB9は、免疫プロテアソームの触媒サブユニットであるLMP2（β1i）をコードしており、インターフェロンγによって誘導されるプロテアソームの主要構成要素として、MHCクラスI提示のための抗原ペプチドを産生できるよう加水分解特異性を変化させます。タンパク質分解回転と免疫ペプチドームの組成を調節することにより、LMP2は自然免疫および獲得免疫のシグナル伝達、炎症応答、ならびに細胞ストレスへの適応に影響します。PSMB9活性の変化は、抗原提示の破綻やサイトカイン駆動性経路の異常な活性化と関連づけられており、自己免疫、慢性炎症、そしてがん生物学で観察される免疫回避機構に関わる可能性があります。より広範なユビキチン–プロテアソーム系の一部として、LMP2はプロテオスタシスと免疫のクロストーク、ならびにインターフェロン刺激遺伝子ネットワークを研究するための機序的な切り口を提供します。

LMP2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PSMB9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LMP2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PSMB9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPSMB9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LMP2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPSMB9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLMP2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPSMB9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLMP2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。