LIF CRISPR Activationプラスミド (m): sc-421432-ACT

マウス白血病阻害因子（LIF）は、LIF受容体およびgp130を介してシグナルを伝達し、JAK/STAT3、MAPK/ERK、PI3K/AKT経路を活性化する、多面的作用（プレイオトロピック）をもつIL-6ファミリーサイトカインです。LIFは胚性幹細胞の自己複製と多能性を制御し、アストロサイト分化や神経炎症プログラムに影響を与えるほか、造血系および免疫細胞の挙動を調節します。末梢組織では、サイトカイン駆動性の転写ネットワークを協調的に制御することで、着床と子宮受容能、骨リモデリング、ならびに組織ストレス応答に寄与します。LIFシグナルの破綻（異常な制御）は、炎症やがん生物学のモデルにおいて、幹細胞状態の変化、線維化リモデリング、腫瘍—間質相互作用と関連づけられており、経路および表現型研究における機構的ハブ（要）としての有用性を支持しています。

LIF CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Lifの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LIF CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Lif 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLif転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LIFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLif遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLIF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLif発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLIF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。