LI-cadherin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401229

Descripción general

CDH17 codifica la LI-cadherina, una cadherina no clásica enriquecida en el epitelio intestinal que media la adhesión célula–célula dependiente de calcio y contribuye a la polaridad epitelial y a la función de barrera. A diferencia de las cadherinas clásicas, la LI-cadherina carece del dominio canónico de unión a cateninas, lo que la vincula a mecanismos distintos que controlan la organización de las uniones, la arquitectura tisular y la segregación celular. Las alteraciones en la expresión y localización de CDH17 se investigan con frecuencia en la remodelación epitelial gastrointestinal y en cambios asociados a tumores en adhesión, invasión y programas de diferenciación. Como molécula de adhesión asociada a un linaje, la LI-cadherina también se utiliza para estudiar cómo los receptores de adhesión de membrana se integran con la regulación del citoesqueleto, la inhibición por contacto y las señales del microambiente.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LI-cadherin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CDH17 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CDH17 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CDH17 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LI-cadherin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CDH17 para la investigación de la señalización de LI-cadherin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CDH17 críticos para la función de LI-cadherin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CDH17 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LI-cadherin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido LI-cadherin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CDH17. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LI-cadherin (h) y el plásmido HDR LI-cadherin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CDH17 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CDH17 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.