Plásmido CRISPR de Activación (m) leupaxin: sc-430706-ACT

El gen murino **Lpxn** codifica **leupaxina**, una proteína adaptadora que contiene dominios LIM, se localiza en las adhesiones focales e interactúa con complejos de señalización mediados por integrinas. Al coordinar interacciones con vías del citoesqueleto y de tirosina quinasas, la leupaxina contribuye a la dinámica de la adhesión celular, la migración y programas de mecanotransducción vinculados a la remodelación de actina. La expresión de **Lpxn** y la señalización en adhesiones focales se estudian con frecuencia en contextos en los que se modelan interacciones estroma–inmunidad y fenotipos invasivos, incluida la remodelación tisular asociada a la inflamación y la motilidad celular relevante para el cáncer. Estas propiedades hacen de **Lpxn** un nodo útil para analizar resultados transcripcionales y de señalización dependientes de la adhesión en células de ratón.

leupaxin El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Lpxn sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

leupaxin El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Lpxn en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Lpxn, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de leupaxin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Lpxn y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de leupaxin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía leupaxin en células tumorales con expresión de Lpxn silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.