Plasmide CRISPR d'Activation (h) LC3B: sc-417828-ACT

MAP1LC3B code la protéine associée aux microtubules 1, chaîne légère 3 bêta (LC3B), un modificateur de type ubiquitine qui est clivé puis lipidé pour former LC3-II sur les membranes autophagosomales naissantes. LC3B agit comme échafaudage central de l’autophagie en se liant à des récepteurs de cargaison portant un motif LIR, tels que SQSTM1/p62, coordonnant ainsi la séquestration sélective des cargaisons et la maturation des autophagosomes au sein de la voie de dégradation lysosomale. Cette protéine intègre les signaux liés aux nutriments et au stress, notamment l’initiation de l’autophagie régulée par MTOR et AMPK, et elle est couramment utilisée pour suivre le flux autophagique et la dynamique des vésicules. Une autophagie associée à LC3B dérégulée a été impliquée dans des contextes tels que la neurodégénérescence, l’infection et l’adaptation des cellules cancéreuses au stress, ce qui soutient des études mécanistiques de la protéostase et du contrôle qualité des organites.

LC3B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAP1LC3B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LC3B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAP1LC3B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAP1LC3B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LC3B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAP1LC3B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LC3B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LC3B dans les cellules tumorales présentant une expression de MAP1LC3B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.