L-type Ca++ CP γ1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419413
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- L-type Ca++ CP γ1 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico L-type Ca++ CP γ1, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
L-type Ca++ CP γ1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419413 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Cacng1 codifica a subunidade auxiliar γ1 do canal de Ca++ do tipo L, uma proteína de membrana tetraspânica que modula as propriedades biofísicas e a expressão na membrana de complexos de canais de cálcio dependentes de voltagem em tecidos excitáveis. Ao ajustar o influxo de Ca++, ela influencia o acoplamento excitação–contração, a sinalização dependente de atividade e vias a jusante reguladas por Ca++ que moldam a fisiologia muscular e a excitabilidade celular. A regulação alterada de componentes dos canais de Ca++ do tipo L tem sido associada a perturbações na homeostase do cálcio relacionadas a fenótipos funcionais neuromusculares e cardíacos, tornando o Cacng1 um locus útil para dissecar a biologia de subunidades auxiliares de canais em modelos murinos. Estudos funcionais frequentemente investigam como as subunidades γ afetam o gating do canal, o tráfego intracelular e o acoplamento a respostas transcricionais dependentes de Ca++.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO L-type Ca++ CP γ1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Cacng1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Cacng1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Cacng1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína L-type Ca++ CP γ1.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Cacng1 para a investigação da sinalização de L-type Ca++ CP γ1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Cacng1 críticos para a função L-type Ca++ CP γ1
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Cacng1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo L-type Ca++ CP γ1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo L-type Ca++ CP γ1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Cacng1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo L-type Ca++ CP γ1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR L-type Ca++ CP γ1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Cacng1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Cacng1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.