L-ficolin Plasmide Double Nickase (h2): sc-404837-NIC-2
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- L-ficolin Plasmide Double Nickase (h2) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il L-ficolin Double Nickase Plasmid (h2) e il L-ficolin Double Nickase Plasmid (h22) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FCN2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: L-ficolin Antibody (FCN219): sc-130297
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
L-ficolin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404837-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano FCN2 codifica la L-ficolina, una lectina solubile di riconoscimento dei pattern prodotta principalmente dal fegato, che avvia la via lectinica del complemento legandosi a motivi glucidici microbici e del “self” alterato e reclutando le proteasi MASP per promuovere l’attivazione di C4/C2, l’opsonizzazione e la segnalazione infiammatoria. Attraverso la modulazione della rimozione complementodipendente, dell’agglutinazione e dell’ingaggio dei fagociti, la L-ficolina contribuisce all’omeostasi dell’immunità innata all’interfaccia tra infezione e infiammazione sterile. La variabilità genetica o una deregolazione dell’espressione di FCN2 è stata associata a una suscettibilità modificata alle malattie infettive e a fenotipi infiammatori, a supporto del suo impiego come nodo molecolare che collega l’attività del complemento, le risposte epatiche di fase acuta e le interazioni ospite–patogeno. Modelli di editing genetico o di perturbazione di FCN2 consentono studi meccanicistici sull’attivazione del complemento mediata dalle lectine, sul riconoscimento glicano-dipendente e sulle vie effettrici immunitarie a valle in sistemi cellulari e in vitro pertinenti.
L-ficolin Il plasmide Double Nickase (h2) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FCN2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FCN2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FCN2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FCN2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.