KV1.5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404341

概要

KCNA5はヒトの電位依存性カリウムチャネルサブユニットKV1.5をコードしており、超速延遅整流性電流（IKur）を担う遅延整流性K+チャネルとして、膜の再分極と興奮性の形成に関与します。KV1.5の活性は、電気的に活動する細胞において膜電位を制御することで、活動電位持続時間、不応期特性、ならびにCa2+依存性シグナル伝達に影響し、より広範なイオン恒常性や電気生理学的リモデリング経路とも関連づけられています。KCNA5の発現量やチャネル機能の変化は、心房の電気生理学的変化や不整脈関連の表現型と関連して報告されており、さらにK+フラックスが増殖や遊走を調節する文脈でも研究されています。そのためKCNA5は、心房リモデリングの機序、チャネル病、ならびに膜電位ダイナミクスに感受性のあるシグナルネットワークの研究で頻繁に解析されています。

KV1.5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKCNA5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KCNA5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KCNA5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、KV1.5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、KV1.5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KCNA5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• KV1.5の機能に不可欠なKCNA5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KCNA5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• KV1.5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびKV1.5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KCNA5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  KV1.5 HDRプラスミド（h）および KV1.5 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKCNA5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKCNA5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。