KIR2.3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406604

概要

KCNJ4は内向き整流性カリウムチャネルKIR2.3をコードしており、KIR2.3は4量体からなる膜タンパク質です。過分極電位でK+を優先的に通過させることで静止膜電位を安定化し、細胞の興奮性の形成に寄与します。KIR2.3の活性はカリウム恒常性と電気的シグナル伝達に関与し、興奮性組織における活動電位の再分極や興奮性結合（excitation–contraction/ excitation–secretion couplingなど）といった過程に影響します。Kir2.xファミリーの一員として、Ca2+依存性シグナル伝達や刺激—分泌連関を含む、膜の分極状態に依存する経路と機能的に連動します。内向き整流性チャネル機能の変化は、電気生理学、不整脈発生機序、ならびに興奮性細胞の機能障害の研究において重要であり、KCNJ4はイオンチャネルが細胞表現型に与える寄与を解析するうえで有用な標的となります。

KIR2.3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKCNJ4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KCNJ4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KCNJ4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、KIR2.3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、KIR2.3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KCNJ4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• KIR2.3の機能に不可欠なKCNJ4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KCNJ4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• KIR2.3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびKIR2.3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KCNJ4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  KIR2.3 HDRプラスミド（h）および KIR2.3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKCNJ4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKCNJ4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。