Plasmide Double Nickase (h) Kinectin 1: sc-404296-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Kinectin 1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Kinectin 1 Double Nickase (h) et le plasmide Kinectin 1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KTN1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Kinectin 1 Antibody (A-12): sc-374577
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Kinectin 1 | sc-404296-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Kinectin 1 | sc-404296-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KTN1 code pour la kinéctine 1, une protéine membranaire intégrale enrichie au niveau du réticulum endoplasmique (RE) qui sert de plateforme pour le transport dépendant des microtubules. En interagissant avec les moteurs de kinésine et la machinerie de trafic associée, la kinéctine soutient le positionnement des organites, la dynamique du RE et le mouvement directionnel des vésicules, ce qui influence la sécrétion et le renouvellement membranaire. Ces processus se recoupent avec le remodelage du cytosquelette, la signalisation intracellulaire et les voies de protéostase, souvent perturbées en conditions de stress cellulaire. Des altérations du transport dépendant de la kinéctine et de l’organisation du RE ont été étudiées notamment en neurobiologie et dans d’autres troubles où des défauts du transport axonal, du trafic membranaire ou de l’homéostasie du RE contribuent à des phénotypes liés à la maladie.
Kinectin 1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KTN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KTN1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KTN1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KTN1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.