KCNQ3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403544

Übersicht

KCNQ3 kodiert die Kv7.3‑Untereinheit spannungsabhängiger Kaliumkanäle, die den neuronalen M‑Strom vermitteln – einen zentralen Regulator der Membranerregbarkeit und der Adaptation der Entladungsfrequenz. Durch die Ausprägung unterschwelliger Leitfähigkeiten ist KCNQ3 an Signalwegen beteiligt, die die Schwelle für Aktionspotenziale, die synaptische Integration und Netzwerkoszillationen steuern, häufig im Zusammenspiel mit KCNQ2-haltigen Kanalkomplexen. Eine Störung der durch KCNQ3 vermittelten Ströme verändert die neuronale Feuerrhythmik und wurde mit neuroentwicklungsbedingten und epileptischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was das Gen für Untersuchungen der Funktion kortikaler Schaltkreise relevant macht. KCNQ3 wird außerdem als funktioneller Readout‑Zielmarker in der Ionenkanal‑Pharmakologie und in elektrophysiologischen Workflows eingesetzt, die erregbarkeitsbezogene Signalwege untersuchen.

Das KCNQ3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KCNQ3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KCNQ3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KCNQ3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KCNQ3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KCNQ3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KCNQ3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KCNQ3-Exone abzielen, die für die KCNQ3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KCNQ3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KCNQ3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom KCNQ3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KCNQ3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KCNQ3 HDR-Plasmid (h) und KCNQ3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KCNQ3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KCNQ3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.