JMJD1B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404249-ACT

KDM3B (JMJD1B) codifica uma desmetilase de histonas com domínio JmjC que remove principalmente marcas repressoras de metilação em H3K9, promovendo a acessibilidade da cromatina e a ativação transcricional. Ao remodelar paisagens epigenéticas, a JMJD1B influencia programas gênicos específicos de linhagem, a diferenciação celular e o controle, dependente do contexto, da proliferação e das respostas ao estresse. Sua atividade se integra a redes mais amplas de regulação da cromatina e pode modular a transcrição dependente de sinalização, conectando sinais metabólicos e de desenvolvimento aos resultados de expressão gênica. A desregulação de KDM3B foi relatada em múltiplos contextos de doença, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos do controle epigenético e de estados transcricionais aberrantes em células humanas.

JMJD1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KDM3B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

JMJD1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KDM3B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KDM3B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de JMJD1B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KDM3B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de JMJD1B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via JMJD1B em células tumorais com expressão de KDM3B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.