JIP-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403514-ACT

MAPK8IP2 codifica JIP-2, una proteina scaffold citoplasmatica che organizza i moduli di segnalazione MAPK, in particolare la via JNK (MAPK8/9/10), coordinando le interazioni tra le chinasi a monte e gli effettori a valle. Modellando la dinamica spaziale e temporale delle cascate chinasiche attivate dallo stress, JIP-2 contribuisce alla regolazione dell’apoptosi, delle risposte infiammatorie e dei processi di differenziamento e traffico neuronale. L’attività di MAPK8IP2 è spesso studiata nel contesto del cross-talk della trasduzione del segnale che influenza la funzione sinaptica e la resilienza cellulare allo stress. La disregolazione delle reti di segnalazione incentrate su JNK che coinvolgono JIP-2 è stata associata a meccanismi rilevanti per la neurobiologia e la neurodegenerazione, oltre che a contesti più ampi di segnalazione dello stress implicati in molteplici modelli di malattia.

JIP-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAPK8IP2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

JIP-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAPK8IP2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAPK8IP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di JIP-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAPK8IP2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da JIP-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via JIP-2 nelle cellule tumorali con espressione di MAPK8IP2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.