IP3R-I Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400986-NIC

ITPR1 codifica o receptor de inositol 1,4,5-trifosfato tipo 1 (IP3R-I), um canal intracelular de liberação de Ca²⁺ localizado principalmente no retículo endoplasmático, que acopla o IP3 gerado pela fosfolipase C a rápidos transientes de cálcio no citosol. Por meio da mobilização regulada de Ca²⁺, o IP3R-I modula o acoplamento entre excitação e transcrição, a bioenergética mitocondrial, a autofagia e a sinalização por quinases/fosfatases dependentes de Ca²⁺, incluindo as vias de CaMK e calcineurina–NFAT. Em células humanas, a atividade de ITPR1 integra entradas de GPCRs e de receptores tirosina-quinase para controlar a secreção, a contratilidade e a dinâmica da sinalização neuronal. Alterações na sinalização do IP3R-I e variantes em ITPR1 estão associadas a disfunção neurológica e a distúrbios mais amplos da homeostase de Ca²⁺, tornando esse lócus um alvo frequente em estudos mecanísticos de vias de cálcio intracelular.

IP3R-I O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ITPR1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ITPR1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ITPR1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ITPR1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.