Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
IP3R-I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400986
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- IP3R-I O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico IP3R-I, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:IP3R-I Anticorpo (E-8): sc-271197
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
IP3R-I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400986 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
ITPR1 codifica o recetor de inositol 1,4,5-trifosfato tipo 1 (IP3R-I), um canal de libertação de Ca²⁺ do retículo endoplasmático que converte sinais de IP₃ a jusante de recetores acoplados à PLC em transitórios de cálcio no citosol e na mitocôndria. O fluxo de Ca²⁺ mediado por IP3R-I regula o acoplamento excitação–transcrição, a plasticidade sináptica, a secreção e a apoptose, e integra-se com vias como a sinalização GPCR/RTK–PLCβ/γ–IP₃, calmodulina/CaMK, calcineurina–NFAT e a comunicação nos locais de contacto entre retículo endoplasmático e mitocôndrias. A atividade de ITPR1 molda a homeostase do cálcio e as respostas ao stress, influenciando fenótipos celulares como a atividade elétrica neuronal, a autofagia e a sinalização da resposta a proteínas mal dobradas. Variações genéticas ou desregulação de ITPR1 têm sido associadas a disfunção neurológica, incluindo fenótipos de ataxia espinocerebelosa, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos da sinalização de cálcio em células humanas.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO IP3R-I (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ITPR1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ITPR1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ITPR1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína IP3R-I.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ITPR1 para a investigação da sinalização de IP3R-I, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ITPR1 críticos para a função IP3R-I
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ITPR1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo IP3R-I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo IP3R-I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ITPR1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo IP3R-I Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR IP3R-I (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ITPR1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ITPR1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.