IP-10 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-421031-ACT

マウス Cxcl10 は、インターフェロンγ誘導タンパク質10（IP-10/CXCL10）をコードしている。IP-10/CXCL10 は CXC ケモカインの一種で、主に CXCR3 を介してシグナル伝達し、活性化 T 細胞、NK 細胞、その他の白血球サブセットの走化性および局在を制御する。その発現は IFN-γ およびパターン認識受容体（PRR）経路の下流で強く誘導され、JAK/STAT と NF-κB に連動した炎症プログラムを統合して、組織における免疫監視のあり方を形作る。IP-10 は感染や無菌性炎症の際に、白血球の遊走、内皮活性化、ならびにサイトカインネットワークの増幅を協調的に促す。CXCL10 シグナルの制御異常は、免疫細胞動員の変化が病態に寄与する自己免疫、神経炎症、腫瘍—免疫相互作用のモデルで頻繁に研究されている。

IP-10 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Cxcl10の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IP-10 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Cxcl10 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCxcl10転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IP-10の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCxcl10遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIP-10依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCxcl10発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIP-10経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。