Integrin αX/ITGAX/CD11c Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421170-ACT

Itgax codifica l’integrina αX (CD11c), che eterodimerizza con ITGB2 formando l’integrina leucocitaria αXβ2 (CR4), la quale media l’adesione a superfici opsonizzate con iC3b e contribuisce alla fagocitosi dipendente dal complemento. CD11c è fortemente espresso nelle cellule dendritiche, in sottopopolazioni di macrofagi e in altre popolazioni mieloidi, collegando i segnali della matrice extracellulare e del complemento al rimodellamento del citoscheletro, alla migrazione e alla formazione della sinapsi immunologica. Attraverso la segnalazione outside-in delle integrine, ITGAX influenza vie che coinvolgono chinasi della famiglia Src, Syk, PI3K e piccole GTPasi, che regolano l’acquisizione dell’antigene, il trafficking e i programmi genici infiammatori. Una disregolazione dell’attivazione mieloide e della presentazione dell’antigene associate a ITGAX è stata implicata nell’infiammazione autoimmune, nella biologia delle infezioni croniche e nel rimodellamento del microambiente immunitario tumorale in modelli murini.

Integrin αX/ITGAX/CD11c Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Itgax senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin αX/ITGAX/CD11c Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Itgax nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Itgax, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin αX/ITGAX/CD11c. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Itgax nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin αX/ITGAX/CD11c nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin αX/ITGAX/CD11c nelle cellule tumorali con espressione di Itgax silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.