Integrin αM/CD11b CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400563-ACT

ITGAM kodiert das Integrin αM (CD11b), das mit ITGB2 (CD18) zu einem Heterodimer assoziiert und so den Mac-1/CR3-Rezeptor bildet, der überwiegend auf myeloischen Zellen exprimiert wird. Dieser Adhäsions- und Mustererkennungsrezeptor reguliert das Rollen von Leukozyten, die feste Adhäsion und die Transmigration und moduliert zudem Phagozytose, Degranulation und den oxidativen Burst über Outside-in-Signalwege, an denen Src-Familienkinasen, Syk, PI3K-AKT und MAPK beteiligt sind. Integrin αM/CD11b erkennt außerdem komplement-opsonisierte Zielstrukturen (iC3b) und trägt zur Handhabung von Immunkomplexen sowie zu entzündlichen Zytokinprogrammen bei. Genetische und Expressionsveränderungen in ITGAM werden mit einer fehlregulierten Aktivierung der angeborenen Immunantwort in Verbindung gebracht und in Kontexten wie Autoimmunität, chronischer Entzündung und der Biologie tumorassoziierter myeloischer Zellen untersucht.

Integrin αM/CD11b Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ITGAM-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Integrin αM/CD11b Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ITGAM-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ITGAM-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Integrin αM/CD11b-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ITGAM-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Integrin αM/CD11b-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Integrin αM/CD11b-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ITGAM-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.