Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400614-ACT

ITGA2Bは、血小板および巨核球で高発現する接着受容体インテグリンαIIb（CD41）をコードしており、インテグリンβ3とヘテロ二量体（αIIbβ3）を形成して、血小板凝集時のフィブリノゲンおよびフォン・ヴィレブランド因子の結合を担います。リガンド結合により、αIIbβ3はインサイドアウト／アウトサイドインのシグナル伝達を駆動し、talin／kindlin、Srcファミリーキナーゼ、FAK、PI3K–AKT、MAPKなどを介する経路を通じて、細胞骨格の再構築、フォーカルアドヒージョンの動態、顆粒放出を協調的に制御します。ITGA2Bの発現量と細胞表面での利用可能性は、血小板産生（thrombopoiesis）と止血栓形成の中核をなし、この軸は血小板機能、血管損傷応答、炎症性クロストークの研究と結び付いています。ITGA2Bの制御異常や遺伝性欠損は、血小板の接着・凝集異常と関連しており、異常出血表現型や巨核球成熟の解明に向けた機序的な手がかりを提供します。

Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ITGA2Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ITGA2B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はITGA2B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Integrin αIIb/ITGA2B/CD41の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のITGA2B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIntegrin αIIb/ITGA2B/CD41依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびITGA2B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIntegrin αIIb/ITGA2B/CD41経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。