Integrin α6/ITGA6/CD49f Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400380-ACT

ITGA6 codifica l’integrina α6 (CD49f), una subunità α che si associa principalmente con β1 o β4 per formare recettori leganti la laminina che organizzano l’adesione tra cellula e matrice extracellulare. Attraverso la segnalazione delle adesioni focali e le vie dell’integrin-linked kinase, le integrine contenenti α6 regolano la dinamica del citoscheletro, la polarità cellulare, la migrazione e la sopravvivenza, influenzando il comportamento delle cellule epiteliali e delle cellule staminali/progenitrici. ITGA6 è ampiamente utilizzato come marcatore dei compartimenti epiteliali basali e dei progenitori residenti nei tessuti, e un’alterazione della segnalazione dell’integrina α6 è stata associata a cambiamenti nell’invasività, nello stato di differenziazione e nelle interazioni con il microambiente in molteplici contesti patologici. I suoi ruoli nell’assemblaggio degli emidesmosomi e nell’interazione con la membrana basale lo rendono un bersaglio frequente negli studi sull’architettura tissutale, la riparazione delle ferite e i fenotipi legati alla metastasi.

Integrin α6/ITGA6/CD49f Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ITGA6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin α6/ITGA6/CD49f Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ITGA6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ITGA6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin α6/ITGA6/CD49f. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ITGA6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin α6/ITGA6/CD49f nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin α6/ITGA6/CD49f nelle cellule tumorali con espressione di ITGA6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.