Integrin β4/ITGB4/CD104 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400573-ACT

ITGB4 codifica a integrina β4 (CD104), um receptor transmembranar de adesão que normalmente se associa à integrina α6 para formar a α6β4, um componente-chave dos hemidesmossomos que ancora as células epiteliais à membrana basal rica em laminina. Ao se acoplar a filamentos intermediários e interagir com a sinalização de adesões focais e de fatores de crescimento, a ITGB4 regula a polaridade epitelial, a migração, a sobrevivência e a mecanotransdução, com efeitos a jusante em vias como PI3K–AKT, MAPK e remodelamento do citoesqueleto. A expressão ou a localização alteradas de ITGB4 estão associadas à desorganização da adesão célula–matriz, ao aumento do comportamento invasivo e à remodelação de barreiras epiteliais em múltiplos contextos patológicos. Como a α6β4 integra sinais da matriz extracelular com a sinalização intracelular, ela é amplamente estudada em sinalização dependente de adesão, programas associados à EMT e interações com o microambiente tumoral.

Integrin β4/ITGB4/CD104 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ITGB4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin β4/ITGB4/CD104 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ITGB4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ITGB4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin β4/ITGB4/CD104. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ITGB4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin β4/ITGB4/CD104 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin β4/ITGB4/CD104 em células tumorais com expressão de ITGB4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.