Integrin α4/ITGA4/CD49d Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421162

Panoramica

Itga4 codifica l’integrina α4 (ITGA4/CD49d), una subunità α che si associa a β1 o β7 per formare le integrine α4β1 (VLA-4) e α4β7, mediatori centrali dell’adesione cellula–cellula e cellula–matrice. Questi recettori legano ligandi come VCAM1 e la fibronectina, coordinando il traffico dei leucociti, l’adesione stabile e la migrazione transendoteliale durante la sorveglianza immunitaria e l’infiammazione. La segnalazione di ITGA4 si integra con le vie delle adesioni focali e del rimodellamento del citoscheletro, influenzando programmi di migrazione, sopravvivenza e attivazione, e contribuisce al posizionamento delle cellule ematopoietiche e linfoidi all’interno dei tessuti. Un’attività disregolata dell’integrina α4 è ampiamente studiata nella patobiologia infiammatoria e autoimmune, così come nelle interazioni tumore–stroma che favoriscono l’invasione e la disseminazione metastatica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Integrin α4/ITGA4/CD49d (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Itga4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Itga4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Itga4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Integrin α4/ITGA4/CD49d.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Itga4 per lo studio della segnalazione di Integrin α4/ITGA4/CD49d, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Itga4 critici per la funzione di Integrin α4/ITGA4/CD49d
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Itga4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Integrin α4/ITGA4/CD49d CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Integrin α4/ITGA4/CD49d CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Itga4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Integrin α4/ITGA4/CD49d Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Integrin α4/ITGA4/CD49d (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Itga4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Itga4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.