Integrin β3/ITGB3/CD61 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400216-NIC

ITGB3はインテグリンβ3（CD61）をコードしており、これは膜貫通型の接着受容体で、インテグリンαIIbまたはαVとヘテロ二量体を形成して、細胞外マトリックス（ECM）リガンドに結合し、細胞膜を介した双方向性シグナル伝達を担うαIIbβ3およびαVβ3複合体となります。インテグリンβ3は、フォーカルアドヒージョンや細胞骨格制御因子との連結を通じて、細胞接着、伸展、移動、メカノトランスダクションを調節し、FAK/SRC、PI3K–AKT、RhoファミリーGTPアーゼなどの経路を活性化します。血小板および巨核球では、αIIbβ3シグナルが凝集と血栓形成の中核を担い、一方でαVβ3は内皮細胞や腫瘍細胞のマトリックスとの相互作用に寄与します。ITGB3の発現や機能の変化は、止血機構、血管生物学、炎症、ならびにがんに関連した浸潤・転移の異常と関連づけられており、接着依存的なシグナル伝達ネットワークにおける重要な研究対象として広く解析されています。

Integrin β3/ITGB3/CD61 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ITGB3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ITGB3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ITGB3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ITGB3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。