Int-6 Double Nickase Plasmid (h2): sc-405759-NIC-2
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Int-6 Double Nickase Plasmid (h2) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Int-6 Double-Nickase-Plasmid (h2) und Int-6 Double-Nickase-Plasmid (h22) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EIF3E abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Int-6: sc-133251
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Int-6 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405759-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane EIF3E (Int-6) kodiert eine zentrale Untereinheit des eukaryotischen Translationsinitiationsfaktor‑3‑(eIF3)-Komplexes, der die Rekrutierung der 40S-ribosomalen Untereinheit koordiniert und die Translationsinitiation reguliert, mit nachgelagerten Auswirkungen auf die Proteostase und die Zellzyklusprogression. Int-6 wird mit einer wechselseitigen Kopplung zwischen translationaler Kontrolle und Proteinabbauwegen in Verbindung gebracht, einschließlich Interaktionen mit dem Ubiquitin‑Proteasom‑System, und wird in Kontexten wie der stressinduzierten Umgestaltung der mRNA‑Translation untersucht. Eine veränderte Expression oder Funktion von EIF3E ist mit fehlregulierten Wachstumssignalen assoziiert und wurde in mehreren krebsbezogenen Datensätzen berichtet, was seine Eignung zur Untersuchung onkogener Translationsprogramme und der Genomstabilität stützt. Das Gene Editing von EIF3E ermöglicht mechanistische Studien zur Integrität des eIF3‑Komplexes, zur selektiven mRNA‑Translation und zu Pfadabhängigkeiten in humanen Zellmodellen mittels Knockout-, Knock-in- oder domänenspezifischen Perturbationen.
Int-6 Das Double-Nickase-Plasmid (h2) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EIF3E-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EIF3E abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EIF3E-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EIF3E-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.