Inhibin β-B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421131

Panoramica

Inhbb codifica l’inibina beta-B, una subunità della superfamiglia del TGF-β che forma omodimeri di activina B oppure eterodimeri di activina AB con INHBA, modulando la trascrizione dipendente da SMAD2/3. La segnalazione dell’activina regola lo sviluppo gonadico, la follicologenesi, la funzione delle cellule del Sertoli e della granulosa e, più in generale, il controllo della proliferazione e della differenziazione cellulare, nonché il rimodellamento della matrice extracellulare. Nel topo, un’alterata attività di Inhbb è stata collegata a fenotipi riproduttivi e a una disregolazione endocrina, e la sua via di segnalazione interseca programmi infiammatori e fibrotici attraverso un controllo dipendente dal contesto dell’espressione di citochine e del rimodellamento tissutale. Queste proprietà rendono Inhbb un nodo utile per studiare l’architettura della via TGF-β/activina nella biologia dello sviluppo e in stati cellulari rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Inhibin β-B (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Inhbb in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Inhbb insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Inhbb a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Inhibin β-B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Inhbb per lo studio della segnalazione di Inhibin β-B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Inhbb critici per la funzione di Inhibin β-B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Inhbb per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Inhibin β-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Inhibin β-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Inhbb. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Inhibin β-B Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Inhibin β-B (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Inhbb per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Inhbb definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.