Plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-4I1 (m): sc-420354

Présentation

Il4i1 code l’interleukine-4–induced gene 1 (IL-4I1), une L‑amino‑acide oxydase sécrétée, exprimée par les cellules présentatrices d’antigène et inductible dans des microenvironnements inflammatoires et de type tumoral. IL‑4I1 catalyse la désamination oxydative d’acides aminés tels que la phénylalanine, générant des produits métaboliques, notamment le peroxyde d’hydrogène, capables de moduler l’équilibre rédox et la signalisation immunitaire. Via le métabolisme des acides aminés et les voies de stress oxydatif, IL‑4I1 influence les programmes des cellules myéloïdes, les seuils d’activation des lymphocytes T et des circuits immunorégulateurs plus larges. Une activité dérégulée d’IL‑4I1 a été associée dans la littérature à une immunosuppression modifiée, à l’inflammation chronique et à l’échappement immunitaire lié au cancer, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques d’immunométabolisme dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-4I1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Il4i1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Il4i1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Il4i1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IL-4I1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Il4i1 pour l'étude de la signalisation de IL-4I1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Il4i1 essentiels à la fonction de IL-4I1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Il4i1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IL-4I1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le IL-4I1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Il4i1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IL-4I1 plasmide HDR (m) et le IL-4I1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Il4i1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Il4i1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.