IL-28R Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402530-ACT

IFNLR1 codifica o receptor 1 do interferão lambda (IL-28Rα), a subunidade de ligação ao ligando do complexo recetor do interferão do tipo III, que atua em parceria com IL10RB para mediar respostas às citocinas da família IFN-λ. A ativação do recetor desencadeia a sinalização JAK/STAT, promovendo a transcrição, dependente de STAT1/STAT2/IRF9, de genes estimulados por interferão, que moldam as defesas antivirais da barreira epitelial e a imunidade das mucosas. A atividade de IFNLR1 influencia a programação imunitária inata, a apresentação de antigénios e o tónus inflamatório em tecidos ricos em epitélio, associando a expressão do recetor a variações na restrição antiviral e na patologia mediada pelo sistema imunitário. A desregulação da sinalização IFN-λ/IFNLR tem sido estudada no contexto da suscetibilidade a vírus respiratórios e gastrointestinais, inflamação crónica e interações entre tumores e o sistema imunitário.

IL-28R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IFNLR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-28R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IFNLR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IFNLR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-28R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IFNLR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-28R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-28R em células tumorais com expressão de IFNLR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.