IL-21 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416409-ACT

IL21 umano codifica l’interleuchina-21 (IL-21), una citochina pleiotropica prodotta prevalentemente da sottopopolazioni di cellule T CD4+ attivate, come le cellule T follicolari helper e le cellule Th17. L’IL-21 segnala attraverso il complesso recettoriale IL-21R con la catena γ comune, attivando le vie JAK/STAT, con programmi trascrizionali prominenti dipendenti da STAT3 che regolano il class switching delle cellule B e la differenziazione in plasmacellule, promuovono la funzione delle cellule T CD8+ e modulano la citotossicità delle cellule NK. Coordinando la dinamica dei centri germinativi e le risposte effettrici immunitarie periferiche, l’IL-21 contribuisce all’omeostasi immunitaria e al rimodellamento infiammatorio. Un’espressione o una segnalazione di IL-21 disregolate sono frequentemente studiate in contesti di autoimmunità, infiammazione cronica, disfunzione immunitaria associata alle infezioni e immunologia dei tumori, in quanto determinanti della differenziazione linfocitaria e dell’equilibrio delle reti citochiniche.

IL-21 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IL21 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IL-21 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IL21 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IL21, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IL-21. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IL21 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IL-21 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IL-21 nelle cellule tumorali con espressione di IL21 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.