IL-18R Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405214-ACT

IL18R1 codifica a cadeia alfa do receptor de IL-18 (IL-18R), um receptor de superfície celular que forma um complexo de sinalização com o IL18RAP para mediar a responsividade à citocina pró-inflamatória IL-18. A ligação do ligante promove sinalização dependente de MyD88, com ativação a jusante das vias de NF-κB e MAPK, coordenando programas transcricionais que moldam a polarização Th1, a produção de IFN-γ e a ativação da imunidade inata. A expressão e a sinalização de IL18R1 são relevantes para mecanismos inflamatórios e autoimunes, bem como para a regulação imune em contextos de infeção e no microambiente tumoral. Como resultado, o IL-18R é frequentemente estudado em redes de citocinas que governam a ativação de células imunes, a quimiotaxia e a inflamação tecidular.

IL-18R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL18R1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-18R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL18R1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL18R1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-18R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL18R1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-18R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-18R em células tumorais com expressão de IL18R1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.