Plásmido CRISPR de Activación (h) IL-10Rα: sc-402486-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) IL-10Rα es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) IL-10Rα incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR IL-10Rα (h) y el plásmido de activación CRISPR IL-10Rα (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de IL10RA. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: IL-10Rα Anticuerpo (A-3): sc-365374
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) IL-10Rα | sc-402486-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
Plásmido CRISPR de Activación (h2) IL-10Rα | sc-402486-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
IL10RA codifica la subunidad alfa del receptor de interleucina 10 (IL-10Rα), un componente de unión a citocinas de alta afinidad que se asocia con IL10RB para formar el complejo receptor funcional de IL-10. Tras la unión de IL-10, el receptor activa la señalización de JAK1/TYK2 y, aguas abajo, programas transcripcionales dependientes de STAT3 que restringen la producción de citocinas inflamatorias, limitan la activación de las células presentadoras de antígeno y favorecen una regulación inmunitaria protectora de los tejidos. Por tanto, la función de IL-10Rα es central para la homeostasis de macrófagos y células dendríticas, la tolerancia inmunitaria asociada a la barrera epitelial y la resolución de la inflamación. La desregulación de la señalización vinculada a IL10RA se asocia con una activación inmunitaria aberrante y patología inflamatoria, lo que la hace relevante para estudios de inmunología de mucosas, autoinmunidad e interacciones huésped–microbiota.
IL-10Rα El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IL10RA sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
IL-10Rα El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IL10RA en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IL10RA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IL-10Rα. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IL10RA y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IL-10Rα en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IL-10Rα en células tumorales con expresión de IL10RA silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.