IGFBP4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421065-ACT

O gene Igfbp4 de camundongo codifica a proteína ligadora do fator de crescimento semelhante à insulina 4 (IGFBP4), um regulador secretado da biodisponibilidade de IGF que modula a sinalização de IGF1/IGF2 para influenciar a atividade das vias PI3K–AKT e MAPK. Ao se ligar aos IGFs e moldar o engajamento dos receptores, a IGFBP4 ajuda a controlar o crescimento celular, a sobrevivência, a diferenciação e a remodelação tecidual em múltiplos contextos fisiológicos. A IGFBP4 tem sido associada a processos relacionados à matriz extracelular e a uma regulação sensível a proteases, capaz de ajustar finamente a dinâmica local da sinalização de IGF. O controle desregulado do eixo IGF envolvendo a IGFBP4 é relevante para pesquisas em biologia do desenvolvimento, fibrose e reparo de feridas, fenótipos metabólicos e sinalização no microambiente tumoral em modelos murinos.

IGFBP4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Igfbp4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IGFBP4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Igfbp4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Igfbp4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IGFBP4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Igfbp4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IGFBP4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IGFBP4 em células tumorais com expressão de Igfbp4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.