IGF-1 Receptor α/β/IGF1R Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-421057-NIC

Igf1r codifica o receptor do fator de crescimento semelhante à insulina 1 (IGF-1R), uma tirosina-quinase de receptor sintetizada como um heterotetrâmero α/β que se liga a IGF-1 e IGF-2 para iniciar sinalização mitogênica e pró-sobrevivência. Após a ligação do ligante e a autofosforilação, o IGF-1R ativa as vias PI3K–AKT–mTOR e RAS–RAF–MEK–ERK, coordenando o metabolismo da glicose, a síntese proteica, a progressão do ciclo celular e a resistência à apoptose. Na biologia do camundongo, Igf1r é central para o crescimento embrionário e pós-natal, a regeneração tecidual e a manutenção de células-tronco/progenitoras, com forte comunicação cruzada com a sinalização do receptor de insulina e controle por retroalimentação via proteínas IRS. A sinalização desregulada de IGF-1R é amplamente utilizada como eixo modelo em estudos de transformação oncogênica, fenótipos associados à metástase e distúrbios metabólicos ou do desenvolvimento, nos quais o redirecionamento das vias pode ser investigado em contextos genéticos definidos.

IGF-1 Receptor α/β/IGF1R O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Igf1r em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Igf1r. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Igf1r. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Igf1r interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.