IGF-1 Receptor α/β/IGF1R Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421057-ACT

Igf1r codifica o receptor do fator de crescimento semelhante à insulina 1 (IGF-1R), uma tirosina-quinase de receptor que atua como um heterotetrâmero α/β para transduzir sinais de IGF-1 e IGF-2 na superfície celular. Após a ligação do ligante e a autofosforilação, o IGF-1R ativa as cascatas PI3K–AKT–mTOR e RAS–RAF–MEK–ERK, integrando estímulos que regulam proliferação, sobrevivência, metabolismo e diferenciação. Em modelos murinos, a sinalização de Igf1r é central para o crescimento embrionário e pós-natal, a homeostase tecidual e as respostas ao estresse, e sua desregulação está associada a controle anômalo do crescimento e a programas de sinalização oncogênicos. O IGF-1R também interage com vias do receptor de insulina e influencia circuitos de retroalimentação que moldam o tráfego do receptor, a resistência à apoptose e a bioenergética celular.

IGF-1 Receptor α/β/IGF1R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Igf1r sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IGF-1 Receptor α/β/IGF1R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Igf1r em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Igf1r, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IGF-1 Receptor α/β/IGF1R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Igf1r nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IGF-1 Receptor α/β/IGF1R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IGF-1 Receptor α/β/IGF1R em células tumorais com expressão de Igf1r silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.