Plásmido Doble Nickase (h) Ig J Chain: sc-403642-NIC

JCHAIN codifica la cadena J de las inmunoglobulinas, un pequeño polipéptido secretado que permite la polimerización de IgA e IgM al enlazar las regiones Fc y favorecer el ensamblaje de IgA dimérica e IgM pentamérica. Esta polimerización sostiene la inmunidad mucosa y el transporte eficiente de inmunoglobulinas poliméricas a través de los epitelios mediante el receptor de inmunoglobulina polimérica, integrándose con la diferenciación de las células B y los programas secretorios de las células plasmáticas. La expresión de JCHAIN está estrechamente acoplada a los estados de células secretoras de anticuerpos y a los resultados del cambio de clase, proporcionando una lectura funcional de la maduración de la inmunidad humoral. Los niveles desregulados de JCHAIN se han asociado con una defensa mucosa alterada, discrasias inmunitarias y neoplasias derivadas de células B en las que se ven perturbadas las vías de producción y secreción de inmunoglobulinas.

Ig J Chain El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus JCHAIN en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de JCHAIN. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de JCHAIN. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con JCHAIN alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.