Plásmido CRISPR de Activación (h) IFT172: sc-404379-ACT

IFT172 codifica un componente del complejo B de transporte intraflagelar (IFT) que es esencial para el tráfico anterógrado dentro de los cilios primarios, apoyando el ensamblaje del axonema, el mantenimiento ciliar y la transducción de señales. Al permitir el movimiento de cargas dentro del cilio, IFT172 influye en vías de desarrollo y homeostasis dependientes de los cilios, incluida la señalización Hedgehog y otros procesos mediados por receptores que dependen de una arquitectura ciliar intacta. La interrupción o desregulación de IFT172 se asocia con fenotipos relacionados con ciliopatías, vinculando el transporte ciliar alterado con defectos en el patrón tisular, la función sensorial y el desarrollo de órganos. Como factor de transporte ciliar, IFT172 se utiliza ampliamente para investigar mecanismos de ciliogénesis, la dinámica de señalización mediada por cilios y las relaciones genotipo–fenotipo en modelos celulares humanos.

IFT172 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IFT172 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IFT172 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IFT172 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IFT172, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IFT172. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IFT172 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IFT172 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IFT172 en células tumorales con expresión de IFT172 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.