IFN-γRβ Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402794-ACT

IFNGR2 codifica il recettore 2 dell’interferone gamma (IFN-γRβ), la subunità accessoria di segnalazione del complesso recettoriale dell’IFN-γ che, insieme a IFNGR1, trasmette i segnali dell’interferone di tipo II. Il legame del ligando promuove l’attivazione di JAK1/JAK2 associati al recettore, la fosforilazione di STAT1 e programmi trascrizionali che modellano l’elaborazione e la presentazione dell’antigene, l’attivazione dei macrofagi e le difese antimicrobiche. Attraverso questa via, IFNGR2 influenza il cross-talk della segnalazione infiammatoria con le reti IRF e NF-κB e contribuisce alle risposte cellulo-intrinseche alle citochine immunitarie. L’alterazione della segnalazione del recettore dell’IFN-γ è rilevante negli studi sulla disregolazione immunitaria, sulle interazioni ospite–patogeno modificate e sui meccanismi che modulano la sorveglianza immunitaria antitumorale in sistemi modello umani.

IFN-γRβ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IFNGR2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IFN-γRβ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IFNGR2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IFNGR2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IFN-γRβ. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IFNGR2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IFN-γRβ nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IFN-γRβ nelle cellule tumorali con espressione di IFNGR2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.