IDO Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-421024-LAC

Il gene murino Ido1 codifica l’indoleamina 2,3-diossigenasi (IDO), un enzima eme-dipendente che catalizza il primo passaggio, e quello limitante la velocità, della degradazione del triptofano lungo la via della chinurenina. Regolando la disponibilità locale di triptofano e generando metaboliti bioattivi della chinurenina, IDO influenza la segnalazione della risposta allo stress, la presentazione dell’antigene e programmi di modulazione immunitaria, intersecandosi con vie guidate dagli interferoni e con reti di citochine infiammatorie. L’espressione di Ido1 è comunemente indotta nei compartimenti mieloidi e stromali durante stati infiammatori, plasmando il metabolismo cellulare e l’equilibrio redox. Un’attività di IDO deregolata è stata associata ad alterazioni della regolazione immunitaria e del rimodellamento metabolico in contesti quali infiammazione cronica, autoimmunità, biologia delle infezioni e microambienti immunitari associati ai tumori, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici.

Le particelle di attivazione lentivirale IDO (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Ido1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale IDO (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Ido1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di IDO. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Ido1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.