HYAL4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409245-ACT

O HYAL4 humano codifica uma enzima da família das hialuronidases, implicada na renovação de glicosaminoglicanos da matriz extracelular, influenciando a remodelação de microambientes ricos em hialuronano. Ao modular a composição da matriz pericelular, o HYAL4 pode afetar as interações célula–matriz, a migração e os resultados de sinalização ligados à adesão e às respostas inflamatórias. Alterações no metabolismo do hialuronano têm sido associadas à fibrose tecidual, à dinâmica tumor–estroma e ao tráfego de células imunes, tornando a expressão de HYAL4 uma variável relevante em modelos de doenças. O estudo da regulação e da função de HYAL4 ajuda a esclarecer como o catabolismo de glicanos se integra à homeostase da matriz extracelular e ao comportamento celular.

HYAL4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HYAL4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HYAL4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HYAL4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HYAL4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HYAL4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HYAL4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HYAL4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HYAL4 em células tumorais com expressão de HYAL4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.