Plasmide CRISPR/Cas9 KO HUNK (h): sc-405786

Présentation

HUNK (hormonally upregulated Neu-associated kinase) code une protéine kinase sérine/thréonine de la famille des kinases apparentées à l’AMPK, qui intègre les signaux induits par les facteurs de croissance et les hormones aux comportements des cellules épithéliales. HUNK a été associé à la régulation des programmes de survie cellulaire, au maintien de la polarité et à des processus liés aux vésicules/au trafic intracellulaire qui influencent l’adhésion et la migration, avec des liens rapportés avec les sorties des réseaux PI3K–AKT et MAPK dans des contextes de stress et de prolifération. Une expression ou une activité dérégulée de HUNK a été observée dans plusieurs modèles liés au cancer, où elle est étudiée pour ses rôles dans l’adaptation des cellules tumorales, les caractéristiques métastatiques et les phénotypes de réponse aux traitements. En outre, la biologie de HUNK est pertinente pour les interactions (cross-talk) de signalisation entre kinases dans les tissus mammaires et neuronaux, soutenant des études mécanistiques sur le réagencement des voies de signalisation dans des états cellulaires pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HUNK (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HUNK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HUNK, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HUNK à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HUNK.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HUNK pour l'étude de la signalisation de HUNK, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HUNK essentiels à la fonction de HUNK
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HUNK pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HUNK plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HUNK plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HUNK. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HUNK plasmide HDR (h) et le HUNK (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HUNK pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HUNK définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.