HTF9C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407594-ACT

O TRMT2A humano codifica a HTF9C, uma metiltransferase de tRNA implicada na modificação pós-transcricional de RNA por meio da formação de 5-metiluridina em posições definidas no tRNA. Ao moldar a estabilidade do tRNA e a fidelidade de decodificação, o TRMT2A favorece uma tradução eficiente e a proteostase, processos que influenciam a progressão do ciclo celular e a adaptação ao estresse. A perturbação de redes de modificação de tRNA tem sido associada a alterações no controle translacional e em programas de manutenção do genoma, tornando TRMT2A/HTF9C relevante para estudos de sinalização proliferativa e homeostase celular. Alterações de expressão e função em enzimas modificadoras de tRNA são frequentemente investigadas no contexto da biologia do câncer e da neurobiologia como contribuintes para a desregulação da expressão gênica em nível translacional.

HTF9C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRMT2A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HTF9C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRMT2A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRMT2A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HTF9C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRMT2A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HTF9C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HTF9C em células tumorais com expressão de TRMT2A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.