HSP90B1/HSP90 beta Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400214-NIC

HSP90AB1 codifica a HSP90 beta citosólica (HSP90B1/HSP90 beta), uma chaperona molecular dependente de ATP que estabiliza e promove a maturação de uma ampla gama de proteínas cliente envolvidas na transdução de sinais, no controle do ciclo celular e em respostas ao estresse. Como componente central da rede de proteostase, a HSP90 beta atua em cooperação com co-chaperonas e com o sistema ubiquitina–proteassoma para regular o dobramento de proteínas, o controle de qualidade e a degradação, influenciando vias como MAPK/ERK, PI3K–AKT e respostas a dano no DNA. A perturbação da função da HSP90 beta pode remodelar a estabilidade do proteoma e o manejo do estresse proteotóxico, com relevância para estudos de dependências de sinalização oncogênica, de mau dobramento proteico associado à neurodegeneração e de fenótipos de estresse inflamatório ou metabólico. Como muitas quinases e reguladores transcricionais dependem da atividade da HSP90, HSP90AB1 é frequentemente usado para investigar a robustez de sinalização amortecida por chaperonas e a adaptação celular sob estresse.

HSP90B1/HSP90 beta O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus HSP90AB1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de HSP90AB1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função HSP90AB1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com HSP90AB1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.