HSP90B1/HSP90 beta Plasmide Double Nickase (h): sc-400214-NIC

HSP90AB1 codifica l’HSP90 beta citosolico (HSP90B1/HSP90 beta), uno chaperone molecolare ATP-dipendente che stabilizza e favorisce la maturazione di un’ampia gamma di proteine “client” coinvolte nella trasduzione del segnale, nel controllo del ciclo cellulare e nelle risposte allo stress. In quanto componente centrale della rete di proteostasi, HSP90 beta coopera con co-chaperoni e con il sistema ubiquitina–proteasoma per regolare il ripiegamento proteico, il controllo di qualità e la degradazione, influenzando vie quali MAPK/ERK, PI3K–AKT e le risposte al danno del DNA. L’alterazione della funzione di HSP90 beta può rimodellare la stabilità del proteoma e la gestione dello stress proteotossico, con rilevanza per studi sulle dipendenze della segnalazione oncogenica, sul misfolding proteico associato alla neurodegenerazione e su fenotipi di stress infiammatorio o metabolico. Poiché molte chinasi e regolatori trascrizionali dipendono dall’attività di HSP90, HSP90AB1 è frequentemente utilizzato per indagare la robustezza della segnalazione “tamponata” dagli chaperoni e l’adattamento cellulare in condizioni di stress.

HSP90B1/HSP90 beta Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HSP90AB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HSP90AB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HSP90AB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HSP90AB1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.